SYBR Green I

SYBR Green I (SG) — асимметричный цианиновый краситель[1], используемый в молекулярной биологии для окрашивания нуклеиновых кислот. Семейство красителей SYBR производится компанией Molecular Probes Inc., принадлежащей Thermo Fisher Scientific. SYBR Green I связывается с ДНК, полученный комплекс «ДНК-краситель» лучше всего поглощает синий свет с длиной волны 497 нм (λ max = 497 нм) и излучает зелёный свет (λ max = 520 нм). Краситель предпочтительно связывается с двухцепочечной ДНК, но окрашивает одноцепочечную (ss) ДНК с меньшей эффективностью. SYBR Green также может окрашивать РНК с меньшей эффективностью, чем ssДНК.

Спектрограмма SYBR Green I
Образец спермы сельди, окрашенный SYBR Green в кювете, освещенной синим светом в эпифлуоресцентном микроскопе. SYBR Green в образце связывается с ДНК сперматозоидов и, при освещении синим светом, флуоресцирует, испуская зелёный свет.

Применение

SYBR Green применяется в нескольких областях биохимии и молекулярной биологии. Он используется в качестве красителя для количественного определения двунитевой ДНК в некоторых методах количественной ПЦР[2]. Он также используется для визуализации ДНК в гель-электрофорезе. Более высокие концентрации SYBR Green можно использовать для окрашивания агарозных гелей с целью визуализации присутствующей в них ДНК. Помимо мечения чистых нуклеиновых кислот SYBR Green также можно использовать для мечения ДНК внутри клеток для проточной цитометрии и флуоресцентной микроскопии. В этих случаях может потребоваться обработка РНКазой для уменьшения фона от РНК в клетках.

Безопасность

SYBR Green I продается в качестве замены бромистого этидия, потенциального мутагена человека, поскольку с ним безопаснее работать и не возникает сложных проблем утилизации отходов. Однако любая малая молекула, способная связывать ДНК с высоким сродством, является возможным канцерогеном, включая SYBR Green.

В исследовании с использованием теста Эймса, измеряющего способность химических веществ вызывать мутации, при одинаковой концентрации SYBR Green I был примерно в 30 раз менее мутагенным, чем бромид этидия[3].

Похожие цианиновые красители
  • PicoGreen (PG)
  • SYBR Safe
  • SYBR Gold
  • Thiazole orange (TO)
  • Oxazole yellow (YO)
  • Safe-Green
  • Chai Green

Примечания
  1. Zipper H (2004). “Investigations on DNA intercalation and surface binding by SYBR Green I, its structure determination and methodological implications”. Nucleic Acids Research. 32 (12): e103. DOI:10.1093/nar/gnh101. PMID 15249599.
  2. Mackay IM (March 2002). “Real-time PCR in virology”. Nucleic Acids Res. 30 (6): 1292—305. DOI:10.1093/nar/30.6.1292. PMID 11884626.
  3. Singer VL (February 1999). “Comparison of SYBR Green I nucleic acid gel stain mutagenicity and ethidium bromide mutagenicity in the Salmonella/mammalian microsome reverse mutation assay (Ames test)”. Mutation Research. 439 (1): 37—47. DOI:10.1016/s1383-5718(98)00172-7. PMID 10029672.
This article is issued from Wikipedia. The text is licensed under Creative Commons - Attribution - Sharealike. Additional terms may apply for the media files.